Бромфеноловий синій для роботи з ДНК і не тільки

Бромфеноловий синій - органічна сполука, трифенілметановий барвник. Правильна хімічна назва: 3',3",5',5"-тетрабромофенолсульфонфталеїн. У літературі можна зустріти такі його назви, як БФБ; альбутест; бромфенолбляу; 4,4'-(1,1-діоксидо-3Н-2,1-бензоксатіол-3,3-дііл) біс (2,6-дибромофенол); тетрабромфенолсульфофталеїн. Його формула: C19H10Br4O5S. Одержують реактив із розчину фенолсульфонфталеїну та брому.

Властивості

БФС випускається у вигляді кристалічної порошкоподібної речовини різних відтінків червоного та синього, від рожево до світло-коричневого, червоного та фіолетового. Без запаху, слабо розчинний у воді, розчинний в етанолі, ацетоні. Горюче, але не вибухонебезпечне. Помірно токсичний.

Реактив взаємодіє з сильними окислювачами та лугами. Виявляє властивості кислотно-основного індикатора, змінюючи забарвлення розчину в залежності від його кислотності в інтервалі рН 30-46. При рівні кислотності нижче 3,0 розчини забарвлені жовтий колір; при рівні кислотності вище 4,6 колір стає синім. Реакція оборотна — якщо розчин зробити більш кислим, його колір знову стане жовтим.

Запобіжні заходи

Тетрабромфенолсульфофталеїн відноситься до 3-го класу небезпеки для людини. Світиться, може спалахувати при t вище +580 °С, не вибухає. Його пил при вдиханні чи ковтанні негативно впливає на внутрішні органи (нирки, печінку, нервову систему, кров). Дратує слизові оболонки органів дихання, очей. Не має помітного впливу на шкіру. Речовина не накопичується в організмі. Чи не проникає в кров через шкіру.

При роботі з реагентом слід використовувати гумові рукавички, захисні окуляри, респіратори типу «Пелюстка».Приміщення має бути оснащене припливно-витяжною системою вентиляції, системою пожежогасіння, засобами для гасіння вогню (вогнегасники, пісок, ковдри азбесту).

Зберігають бромфеноловий синій при кімнатній температурі, у герметичній тарі на критих складах, що захищають від прямого сонячного проміння.

Застосування

• У біологічних та мікробіологічних дослідженнях служить для візуального контролю міграції ДНК, РНК або білків у гелі з агару або поліакриламіду. При проведенні електрофорезу в слаболужному або нейтральному середовищі молекули реагенту мають яскраво-фіолетовий колір. Заряджені негативно, вони переміщаються від катода до анода у тому напрямі, що неклеотиди (ДНК, РНК) і білки. Підбираючи концентрацію гелю, дослідник може спостерігати швидкість міграції фрагментів ДНК того чи іншого розміру (у густішому гелі швидкість переміщення молекул БФС відповідає швидкості більш коротких фрагментів).
• У колориметричному визначенні рівня рН розчину; у титруванні.
• Барвник тканин та зрізів біологічних зразків у мікробіології та біології.
• Під час проведення хроматографії органічних речовин на папері.

БРОМФЕНОЛОВИЙ СИНІЙ: ХАРАКТЕРИСТИКИ, ПРИГОТУВАННЯ, ЗАСТОСУВАННЯ, ТОКСИЧНІСТЬ - БІОЛОГІЯ - 2024

Бромфеноловий синій є органічної хімічної природи, завдяки властивості , що мають певні значення рН низькою липкістю використовується для власника хімічних речовин. Тобто він є корисним як індикатор pH.

Він також відноситься до трифенілметанових барвників. Сполуки трифенілметану та їх похідні зазвичай використовуються як барвники у харчовій, фармацевтичній, текстильній та поліграфічній промисловості.

Склад бромфенолового синього.Кольори, які він приймає відповідно до pH. Джерело: Panoramix303/Pxhere.com. Відредаговане зображення

Цей індикатор pH жовтий при pH ≤ 3 і пурпурово-фіолетовий pH ≥ 4,6. Отже інтервал візуального переходу становить від 3 до 4,6.

Ця речовина також відома як тетрабромфеноловий синій, але його наукова назва – 3,3,5,5 – тетрабромфенолсульфонфталеїн; та його хімічна формула, C ₁₉ H ₁₀ Br ₄ O ₅ S.

Індикатор pH бромфенолового синього має низьку токсичність для шкіри та слизових оболонок, а також доведено, що він не є мутагенним. В даний час він використовується в методах поділу білків методом електрофорезу в поліакриламідному гелі та двовимірному електрофорезі.

Він стає гарним барвником для використання in vivo у терапевтичних операціях для видалення склоподібного тіла та інших кристалічних структур ока у людей. Цей метод полегшить візуалізацію цих структур під час операції, гарантуючи їхнє правильне вилучення.

характеристики

Бромфеноловий синій являє собою кристалічний порошок коричнево-жовтогарячого або червоно-пурпурового кольору. Він має температуру кипіння 279 ° C, а його молекулярна маса становить 669,96 моль/л. Температура плавлення коливається в межах 270–273°С.

підготовка

Зазвичай цей індикатор pH використовується при концентрації 0,1% з використанням 20% етилового спирту як розчинник, оскільки він слабо розчинний у воді.

Однак є й інші речовини, які служать як розчинники, такі як оцтова кислота, метиловий спирт, бензол і деякі лужні розчини.

Для техніки електрофорезу використовують у концентрації (0,001%).

використання

Індикатор PH

Це один із найчастіше використовуваних індикаторів pH у хімічних лабораторіях для кислотно-основного титрування.

Пляма в техніці електрофорезу

Бромтимоловий синій використовується як 0,001% барвника при розділенні білків методом електрофорезу в поліакриламідному гелі (SDS-PAGE). Ця методологія корисна для контролю додавання різної білкової сировини деякі оброблені харчові продукти, такі як ковбаси.

Бромфеноловий синій 0,05% також використовується у методиці двовимірного електрофорезу.

Ця корисність можлива завдяки тому, що барвник бромфеноловий синій має заряд і легко переміщається в гелі, залишаючи на своєму шляху чітко видимий синьо-фіолетовий колір. Крім того, він переміщається набагато швидше, ніж білки та молекули ДНК.

Таким чином, бромфеноловий синій чудово підходить для позначення передового фронту, дозволяючи зупинити електрофорез у потрібний час, без ризику того, що молекули, виявлені в пробі, вийдуть із гелю.

токсичність

Пряма контактна токсичність

У цьому сенсі NFPA (Національна асоціація протипожежного захисту) класифікує цю речовину як небезпечну для здоров'я (1), займистість (0) та реактивність (0). Це означає, що він є низьким ризиком для здоров'я, і ​​насправді він відсутній в останніх двох відносинах.

Злегка дратує шкіру. У разі прямого контакту рекомендується негайно зняти забруднений одяг та промити великою кількістю води. При попаданні на слизові оболонки негайно промити, якщо потерпілий носить контактні лінзи, слід негайно зняти і звернутися за медичною допомогою.

У разі вдихання слід надати першу допомогу, наприклад, штучне дихання та негайну медичну допомогу.

При випадковому ковтанні слід викликати блювання і ввести 200 мл води. Згодом постраждалого необхідно доставити до найближчого медичного центру.

Дослідження генотоксичності

Дослідження генетичної токсичності бромфенолового синього були виконані з використанням різних методологій, таких як метод Ames Salmonella/мікросом, аналіз лімфоми миші L5178Y TK+/-, аналіз мікроядер миші та мітотична рекомбінація зі штамом D5 дріжджів Saccharomyces cerevisia.

Проведені дослідження показали, що бромфеноловий синій не має генотоксичної дії. Тобто випробування визначили, що не було генетичної мутації, хромосомних аберацій та первинного пошкодження ДНК.

Дослідження генотоксичності було необхідно провести, оскільки аналогічні зі структурної точки зору сполуки виявляли мутагенну дію. Однак тепер відомо, що такі ефекти пов'язані з наявністю мутагенних домішок, а не з самою сполукою.

Гістологічне дослідження токсичності

З іншого боку, Haritoglou та ін. Провели дослідження, де вони оцінили вплив нових життєво важливих барвників in vivo у короткостроковій перспективі для внутрішньоочної хірургії. Серед випробуваних барвників був синій бромфеноловий. Барвник розчиняли у збалансованому сольовому розчині.

Дослідники провели вітректомію (видалення склоподібного тіла ока) на 10 свинячих очах in vivo. Згодом вони вводили барвник у порожнину та давали йому діяти протягом 1 хвилини, а потім промивали фізіологічним розчином. Вони також забруднили капсулу кришталика того ж ока. Надалі очі досліджували за допомогою світлової та електронної мікроскопії.

З усіх оцінюваних барвників бромфеноловий синій був тим, який мав найкращу відповідь, забарвлюючи на 2%, 1% та 0,2% і водночас не викликаючи гістологічних змін, які показали токсичність.

Таким чином, він стає найкращим кандидатом для використання у людей під час ретиновітреальних операцій, полегшуючи візуалізацію склоподібного тіла, епіретинальних мембран та внутрішньої обмежуючої мембрани.

Посилання

1. "Бромфеноловий синій". Вікіпедія, вільна енциклопедія. 9 травня 2019, 09:12 UTC. 24 травня 2019, 20:57: en.wikipedia.org.
2. Лопес Л., Греко Би., Ронейн П., Валенсія Е. Алан. 2006 вер; 56 (3): 282-287. Наявність: scielo.org.
3. Ечеверрі Н., Ортіс, Бланка Л. та Камінос Дж. (2010). Протеомний аналіз первинних культур щитовидної залози. Колумбійський журнал хімії, 39(3), 343-358. Отримано 24 травня 2019 р. із сайту scielo.org.
4. Lin GH, Brusick DJ. Дослідження мутагенності двох трифенілметанових барвників, бромфенолового синього та тетрабромфенолового синього. J Appl Toxicol. 1992 Aug; 12 (4): 267-74.
5. Haritoglou C, Tadayoni R, May CA, Gass CA, Freyer W., Priglinger SG, Kampik A. Короткострокова оцінка in vivo нових життєво важливих барвників для внутрішньоочної хірургії. Сітківка. Липень-серпень 2006 р.; 26 (6): 673-8.