Як виділити чисту культуру?

Виділення чистих культур шляхом висіву на чашки Організми ростуть на агаризованому середовищу, життєздатний організм утворює колонії, використовується посів на чашки штрихом, глибинний посів. Для виділення аеробів використовують метод глибинного посіву.

Яка мета 1 го етапу виділення чистої культури мікроорганізмів?

Здійснюють перший етап виділення чистих культур аеробних і анаеробних бактерій, здійснюючи посів матеріалу на тверді поживні середовища з метою одержання ізольованих колоній.

Що лежить в основі бактеріологічного методу?

В основі бактеріологічного методу дослідження лежить отримання чистої культури збудника хвороби з подальшим її вивченням та підбором антибіотиків для лікування. Вибір матеріалу щодо дослідження обумовлюється локалізацією патологічного процесу.

Етапи видiлення чистих культур мiкроорганiзмiв — …

Етапи видiлення чистих культур мiкроорганiзмiв. Виділення чистої культури аеробних мікроорганізмів складається з ряду етапів. У перший день (І етап дослідження) у стерильний посуд (пробірка ...

Мікробіологічна культура

Мікробіологічна культура (англ. Microbiological culture, також часто у вузькому сенсі Бактеріологічна культура, Бактеріологічний посів) — спосіб лабораторного виділення мікроорганізмів. Він є основним методом діагностики, що використовуються як інструмент дослідження в молекулярній біології. Виділення вірусів є частиною мікробіологічної культури, як вірусологія є частиною мікробіології.

Культури мікроорганізмів використовуються для визначення його виду та чисельності. Це один з основних методів мікробіологічної діагностики, що використовується як інструмент для визначення причини інфекційних захворювань, шляхом розмноження збудника у заздалегідь визначеному поживному середовищі. Термін «культура» загалом використовується неофіційно для позначення «селективного вирощування» певного виду мікроорганізмів у лабораторії.

Часто важливим є виділити чисту культуру мікроорганізмів. Чиста (або аксенова) культура — це популяція клітин або багатоклітинних організмів, що ростуть за відсутності інших видів. Чиста культура може утворюватися з однієї клітини або окремого організму, і в цьому випадку клітини є генетичними клонами один одного. З метою гелеутворення мікробіологічної культури використовується середовище агарового гелю, драглиста речовина, що отримується з морських водоростей. Дешевим замінником агару є гуарова камедь, яку можна використовувати для ізоляції та вирощування термофільних бактерій.

Зміст

Бактеріологічний посів [ ред. | ред. код ]

Бульйонні культури [ ред. | ред. код ]

Одним із методів бактеріологічного посіву є рідка культура, в якій бактерії суспендують у рідкому живильному середовищі, такому як бульйон Лурія [en] , у вертикальній колбі. Рідкі культури дають можливість провести бактеріологічний аналіз. Дослідник вводить бактерії до бульйону і дає їм рости впродовж ночі. Іноді може використовуватися шейкер для рівномірного росту в бульйоні. Згодом береться зразок для тестування на антимікробну активність певного препарату або білка. Як альтернативне мікробіолог може прийняти рішення використати статичні рідкі культури. Їх не струшують, і вони забезпечують мікроорганізмам градієнт кисню.

Вирощування на основі агару [ ред. | ред. код ]

Мікробіологічні культури можна вирощувати в чашках Петрі різних розмірів, що мають тонкий шар середовища для росту на основі агару. Після того, як середовище для вирощування в чашці Петрі засіяно бажаними бактеріями, пластинки інкубують при оптимальній температурі для вирощування цих вибраних бактерій. Є безліч добавок, що можна додати в агар перед тим, як його залити в чашку Петрі і дати застигнути. Деякі види бактерій можуть рости лише за наявності певних добавок. Це можна використати для створення спеціальних ліній бактерій, що містять ген стійкості до антибіотиків. Коли до агару додають обраний антибіотик, зможуть рости лише ті бактерії, що містять генну вставку стійкості. Це дозволяє досліднику відбирати лише колонії, які були успішно перетворені.

Стрічки на основі агару у вигляді пластин можна використовувати для діагностики. Вони мають переваги перед чашками Петрі оскільки вони економічно ефективні, а їх експлуатація не вимагає досвіду чи лабораторного середовища, що дозволяє використовувати їх у відділеннях та інших медичних закладах.

Пробіркові культури подібні до агарових пластин, але утворені твердим агаром у пробірці. Бактерії вводяться за допомогою прищеплювальної голки або наконечника піпетки, уколом у центр агару. У проколотій зоні ростуть бактерії. Такі культури найчастіше використовують для короткочасного зберігання або пересилання культур до інших лабораторій.

Тверді пластинчасті культури теплолюбних мікроорганізмів [ ред. | ред. код ]

Для твердих пластинчастих культур термофільних мікроорганізмів, що вирощуються при температурах від 50 до 70 °C, доведено, що гелева камедь з низьким вмістом ацилу як гелю є кращою порівняно з агаром для виділення теплолюбних бактерій.

Музейні культури [ ред. | ред. код ]

Колекції культур мікроорганізмів використовуються для аутентифікації, вироблення, збереження, каталогізації та розподілі життєздатних культур стандартних еталонних мікроорганізмів, клітинних ліній та інших матеріалів для досліджень і систематики. Музейні колекції культур також є сховищами клітинних ліній мікроорганізмів.

Вирощування еукаріотних клітинних культур [ ред. | ред. код ]

Клітинні культури — генетично однорідні популяції клітин, що ростуть у постійних умовах оточуючого середовища. Це можуть бути лінії нормальних клітин людини, тварин, рослин або тканин злоякісних пухлин. Клітини звичайно поміщають у скляні посудини, звідси таке дослідження отримали назву in vitro, хоча частіше культури наразі вирощують у пластмасових посудинах. Виділені з тканин клітини інкубуються при температурі +38-39 °C (для клітин тваринного і людського походження) та при +22-28 °C (для клітин рослинного походження) у поживному середовищі відповідного складу. Клітини тоді ростуть у вигляді суспензії чи одного шару.

Суспензійна культура отримується вирощуванням окремих клітин чи невеликих їх груп у завислому стані в рідкому поживному середовищі з використанням апаратури, що забезпечує їхню аерацію і перемішування. Характерною особливістю цих культур є їхня морфологічна та біохімічна гетерогенність. У цитології цей метод зручний тим, що клітини в культурі легко доступні для різних біохімічних маніпуляцій — радіоактивні речовини, отрути, гормони тощо можуть бути введені у потрібній концентрації впродовж необхідного періоду часу. Для дослідження живих рослинних клітин використовують культуру ізольованих протопластів. Вона дає можливість вести селекцію на клітинному рівні, працювати у малому об'ємі з великою кількістю клітин, отримувати нові форми рослин шляхом прямого перенесення генів, створювати соматичні гібриди між віддаленими у систематиці видами.

У вірусології культури клітин використовуються широко, оскільки з ними відносно легко працювати у лабораторії, на відміну від інших методів — вирощування вірусів на курячих ембріонах або в організмі живих тварин. Крім того на моношарі клітинної культури можна добре вивчити цитопатичну дію різних вірусів за утворенням внутрішньоклітинних включень, бляшок, у реакціях гемадсорбції й гемаглютинації, за кольоровою пробою.

Культури клітин широко застосовуються для тестування дії фармакологічних речовин, що можуть бути використані як лікарські препарати. Також застосовуються в біотехнології, генетиці.

Вирощування вірусів і бактеріофагів [ ред. | ред. код ]

Спосіб лабораторного виділення вірусів на культурі клітин. Лабораторна техніка, при якій матеріал, що містить вірус, розміщують у різних клітинних лініях, які вірус, що тестується, здатний заразити. Якщо клітини виявляють цитопатичні ефекти чи інші види змін, тоді культура вважається позитивною. Застосовуються різні методи вирощування: тканинні культури, вірусна культура у флаконах, зараження курячих ембріонів (на хоріоналантоїсну оболонку, в алантоїсну порожнину, в жовтковий мішок), зараження лабораторних тварин.

Чиста культура [ ред. | ред. код ]

Це популяція клітин, що походить від єдиної батьківської клітини. Їх отримують працюючи в стерильних умовах, шляхом вирощування ізольованих колоній мікроорганізмів, зазвичай у чашці Петрі, яка має містити відповідні поживні речовини для досліджуваного мікроорганізму. Чашки Петрі утримуються у відповідних умовах достатньо довго, щоб з'явилися видимі ізольовані колонії.

Джерела [ ред. | ред. код ]

• Madigan, Michael T. (2012). Brock biology of microorganisms (13th ed.). San Francisco: Benjamin Cummings. ISBN 9780321649638. (англ.)



• Uruburu, F. (2003). «History and services of culture collections» (PDF). International Microbiology. 6 (2): 101—103. doi:10.1007/s10123-003-0115-2. PMID 12811589 (англ.)



• Медицинская микробиология: учебное пособие / Поздеев О. К. Под ред. В. И. Покровского — 4-е изд. , испр. — Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2010. — 768 с. — ISBN 978-5-9704-1530-6. (рос.)



• Микробиологическая диагностика инфекционных заболеваний / Под ред. Е. П. Красноженова, О. П. Бочкаревой. — Ростов-на-Дону; Томск: Сиб. гос. мед. ун-т, 2006. — 299 с. : ил., схемы. ; 20 см. — (Медицина для вас). — Библиогр.: с. 297 ISBN 5-222-08613-5 (рос.)

Посилання [ ред. | ред. код ]

Класичний бактеріологічний метод

Бактеріологічний (культуральний) метод дослідження полягає у виявленні патогенних мікроорганізмів і визначенні їх чутливості до антибіотиків. Процес виявлення мікроорганізмів складається з декількох етапів:

1. 1. Посів матеріалу на поживні середовища.



2. 2. Отримання чистих культур мікроорганізмів.



3. 3. Ідентифікація мікроорганізмів.



4. 4. Визначення чутливості до антибіотиків, антімікотіков.

Перший і другий етапи бактеріологічного дослідження однакові і для класичного, і для автоматичного бактеріологічних методів.

Біологічний матеріал висівають на живильні середовища. Для кожного виду біологічного матеріалу використовується певний набір. Це пов'язано з тим, що в різних видах біологічного матеріалу знаходяться різні види мікроорганізмів і необхідно, щоб виросли максимально усі. Використовуються поживні середовища загального призначення - на них зростає переважна більшість мікроорганізмів - кров'яний агар, шоколадний агар; диференціальні середовища - дозволяють відрізняти різні види мікроорганізмів - середовище Ендо для ентеробактерій, селективні середовища - ростуть тільки окремі види бактерій - ентерококагар для виявлення ентерококів, манітол-сольовий агар для виявлення стафілококів.

Посів роблять таким чином, щоб отримати окремі ізольовані колонії.

Посіви поміщають в термостат, як правило, на 24 год при 37С. Деякі посіви інкубують при 28С, а деякі протягом 48 годин. Посіви для виявлення грибів роду Candida до 5 діб, міцеліальних грибів - до 30 діб.

Переглядають посіви на поживних середовищах. За зовнішнім виглядом колоній (розмір, колір, форма), певними швидкими тестами і мікроскопією визначають можливий вид мікроорганізмів і їх значення в конкретному випадку. Вибрані колонії відсівають на універсальні поживні середовища для накопичення чистої культури мікроорганізмів. У разі зростання колоній тільки одного виду можна проводити ідентифікацію і визначення чутливості без етапу накопичення чистої культури.

Залежно від виду мікроорганізму проводять його ідентифікацію (визначення біохімічних і антигенних властивостей) за допомогою фіксованого набору субстратів і сироваток. Субстратами є вуглеводи, амінокислоти та інші складні сполуки. За результатами встановлюють рід і вид мікроорганізму.

Для встановлення виду деяких мікроорганізмів може знадобитися серологічна ідентифікація.

Всі середовища для ідентифікації та визначення чутливості до антибіотиків готуються і стерилізуються окремо. Така процедура дуже трудомістка, тобто вимагає багато ручної праці і часу, додаткового обладнання. Таким чином у даного методу низький рівень стандартизації.

Для ідентифікації деяких вимогливих клінічно значущих видів мікроорганізмів необхідні складні і дорогі субстрати, які в рутинній практиці важко готувати і використовувати. Через це спектр мікроорганізмів, які можна було б ідентифікувати, звужується в порівнянні з можливостями автоматичного аналізатора.

Визначення чутливості до антибіотиків проводиться з урахуванням результатів ідентифікації та виду біологічного матеріалу.

При використанні класичного бактеріологічного методу, визначення чутливості до антибіотиків відбувається диско-дифузійним методом. Цей метод базується на вивченні зон затримки росту мікроорганізму навкруги паперового диска, який просочений антибіотиком. Залежно від зон затримки росту визначають стійкі, помірно-стійкі та чутливі штами мікроорганізмів до того чи іншого антибіотика. Даний метод є найбільш поширеним для вивчення чутливості, а також дешевим і простим у виконанні. Однак він також погано піддається стандартизації, оскільки вимагає багато ручної праці.

Крім того, відповідно до рекомендацій міжнародних організацій, які займаються вдосконаленням існуючих методик і розробкою нових (EUCAST - Європейський комітет з визначення чутливості до антибіотиків, CLSI - Інститут клінічних лабораторних стандартів), чутливість до деяких антибіотиків МОЖНА визначати диско-дифузійним методом, оскільки не визначені критерії оцінки отриманих результатів.

• 1. колістином - кишкова паличка, клебсієла і інші ентробактеріі, синьогнійна паличка, ацинетобактер,



• 2. бета-лактами (пеніциліни, цефалоспорини, карбапенеми), глікопептиди (ванкоміцин, тейкопланін), даптоміцином, фосфоміцин - стафілококи,



• 3. даптоміцином - стрептококи груп А, В, С і G,



• 4. меропенем - пневмококи при менінгітах



• 5. бета-лактами (пеніциліни, цефалоспорини, карбапенеми) - пневмококи.

Крім того існують мікроорганізми, чутливість яких до антибіотиків взагалі не можна визначати диско-дифузійним методом: Neisseria gonorrhoea, Neisseria meningitidis, все анаеробні мікроорганізми, Helicobacter pylori, Candida spp., Aspergilus spp. та інші міцеліальні гриби.

В даний час проведення мікробіологічних досліджень є важливою і актуальною діяльністю в біології та медицині, так як вони дозволяють з високим ступенем точності і достовірності підтвердити або спростувати факт присутності в організмі людини збудників інфекційних захворювань. Класичний бактеріологічний метод дослідження вирішує завдання виділення чистої культури збудника з його подальшою ідентифікацією. Завдяки мікробіологічних методів дослідження можна встановити збудників тих чи інших інфекційних захворювань і підібрати раціональне лікування цього захворювання.

Переваги автоматичного методу

- Швидкість отримання результату. Результат наших досліджень є максимально швидким. Вже на 3 добу Ви отримуєте назву мікроорганізму, який був виявлений в досліджуваному зразку, а також його чутливість до антибіотиків. (!) Термін досліджень в автоматичному методі продовжений до 5 діб за рахунок тривалого росту грибів роду Candida.

- Точність. Автоматичний аналізатор дає можливість швидко і дуже точно визначити який саме з 400 мікроорганізмів є в біоматеріалу.

- Великий спектр антибіотиків до яких визначається чутливість дозволяє лікарю призначити найбільш раціональну антибіотикотерапію з урахуванням характеру захворювання та особливостей пацієнта. До того ж визначення чутливості таким методом є максимально швидким і точним у порівнянні з класичним.

Важливо! В результаті мікробіологічного дослідження проведеного автоматичним методом антибіотикочутливість видається з показником МІК * (мінімальна інгібуюча концентрація)

Читайте також

09 квітня 2019 р. в IMD пройшов круглий стіл для пульмонологів, реаніматологів та анестезіологів в парк- готелі «Голосієво» відбувся круглий стіл «Позагоспітальні та госпітальні пневмонії. Ді..

Вибір схеми лікування оніхомікозу повинен грунтуватися на стані здоров'я пацієнта, наявності у нього супутніх захворювань і ступені тяжкості захворювання.Місцева терапія застосовується:- в комбінації ..

Клінічно відрізнити псоріаз від грибка може бути важко. Для обох захворювань характерна наявність чітко визначених ділянок почервоніння з лущенням. І в деяких випадках достовірну відповідь може дати т..

В мікології відомо близько 3 мільйонів видів грибів, але багато з них ще доведеться відкрити. Гриби існують дуже давно: найстаріша скам'янілість грибів має вік близько одного мільярда років. Були вияв..

Коли на прийом до лікаря потрапляє дитина - це завжди хвилююче. Багато захворювань у дітей, а особливо дерматологічні, мають свої особливості перебігу та лікування.Вважається, що діти більш схильні до..

Комплексне дослідження, що визначає рівень ліпідів (жирів) різних фракцій крові, називають ліпідограму або ліпідним профілем. Рівень холестерину в крові є важливим показником здоров'я. Холестерин п..

На відміну від інших грибів, дерматофіти можуть викликати інфекції у здорових, імунокомпетентних людей. За оцінками, від 30 до 70% дорослих є безсимптомними носіями цих грибів.Trichophyton rubrum - на..

Світлова і люмінесцентна мікроскопія - ефективний тандем в діагностиці мікозу.Свого часу світлова мікроскопія стала справжнім проривом в діагностиці. Однак пізніше виявилося, що не всі збудники і не в..

Графік людей, які пізно лягають спати і пізно прокидаються, часто не відповідає загальноприйнятій робочій нормі. І тоді ці люди стають не зовсім працездатними. А все через те, що їх біологічний годинн..

Грибок нігтів або оніхомікоз – поширене захворювання, яке вражає людей різного віку. Грибок є не тільки косметичною проблемою, адже його розвиток небезпечний – інфекція може перейти на здорові ділянки..

Весь світ зараз бореться з поширенням коронавіруса. З 12 березня в Україні був введений карантин, для стримування зростання числа хворих. На даний момент відомо, що вірус передається від людини до ..

З огляду на події, що нещодавно сталися в Харкові, де після відвідування ресторану відомої мережі 85 осіб захворіли на сальмонельоз та більшість з них була госпіталізована. В ході перевірки у 6-..

ст.м. Житомирська
пр-т Берестейський, 119-121, корпус 5

ст.м. Оболонь
пр-т Оболонський, 14

Дарницька площа (Ленінградська)
пр-т Соборності, 8/2