Як зберігати пробірки для аналізів

Вакуумна пробірка – основний інструмент для забору венозної крові. Вона може бути наповнена реагентом, який дозволить провести швидкий та точний аналіз. У такому разі кожна пробірка має ковпачок свого кольору. Кольорове кодування відповідає міжнародному стандарту ISO 6710.

Вакуумні пробірки для одержання сироватки (біохімія, серологія). Колір кришечки – коричневий чи червоний

Сироватка крові – рідка частина крові позбавлена ​​формених елементів та деяких білків (фібрин та ін) на відміну від плазми, в якій зберігаються всі елементи рідкої частини крові, крім формених елементів.

Одержання сироватки крові є результатом двоступінчастого біохімічного процесу: згортання (коагуляції) крові та ретракції (ущільнення) згустку. Для запуску коагуляційного каскаду необхідна наявність зовнішнього активатора, яким може служити кремнію діоксид, тому процес згортання крові швидше відбувається у скляних пробірках, оскільки кремнію діоксид є базовим матеріалом скла або пластикових пробірках з активатором згортання. Активатор зсідання (clot activator) виконаний у вигляді напилення на внутрішній стінці пробірки.
Після утворення згустку починається етап його ущільнення та виділення сироватки. Насправді ретракція згустку прискорюється центрифугуванням пробірок із кров'ю.
Для отримання максимально чистої сироватки рекомендується дотримання трьох умов:
1. Після забору крові в пробірку відповідно до інструкції необхідно обережно одноразово перевернути пробірку для повнішого контакту крові з активатором згортання;
2.Дочекатися завершення процесу зсідання крові протягом 20-30 хвилин при кімнатній температурі та вертикальному положенні пробірки;
3. Центрифугувати пробірку з кров'ю, що згорнулася, не менше 10 хвилин з прискоренням 1500 G (приблизно 3000 об/хв) для максимального видавлювання сироватки зі згустку. При необхідності допускається центрифугування із прискоренням 4000G з кришечкою та до 12000G без кришечки.
Після центрифугування та повної ретракції згустку сироватка розташовується над згустком, але в контакті з ним. Зберігається небезпека забруднення сироватки складовими згустку при необережному поводженні з пробіркою (струшування, перекидання та ін.). Для кращого очищення сироватки і повнішого розмежування сироватки і згустку застосовуються спеціальні пробірки, що містять біологічно інертний олефіновий гель. Останній являє собою тиксотропний кополімер, який важчий від сироватки, але легший за кров'яний згусток, тому після центрифугування гель у вигляді тонкої смужки займає проміжне положення і служить роздільним бар'єром. Стабільність такого бар'єру гарантована протягом 5-7 днів під час зберігання пробірки з кров'ю при кімнатній температурі.
Оптимальний термін збереження зразка крові в даних пробірках становить при кімнатній температурі 6 годин, при зберіганні в холодильнику (+4ºС) – 24 години. Повторне центрифугування пробірок, особливо гелем, не допускається.
Отримана сироватка крові застосовується для широкого спектру лабораторних біохімічних, ІФА та імунологічних досліджень:
білковий склад, ферменти, гормони, онкомаркери, ВІЛ-інфікування, гепатити та ін.

Вакуумні пробірки для отримання цільної крові чи плазми

Не всі аналізи в клініці роблять із сироватки крові. Для багатьох видів досліджень необхідна цільна кров, що містить формені елементи, або плазма, що звільнена від клітин крові центрифугуванням. З метою отримання крові, що не згорнулася, розроблені пробірки з певними добавками – антикоагулянтами. На практиці використовують два види антикоагулянтів:
інгібітори (речовини, що спричиняють гальмування) тромбіну. Тромбін є ключовим гравцем у коагуляційному каскаді. Він бере участь у формуванні ряду факторів згортання крові та сприяє трансформації фібриногену у фібрин. Додавання біохімічних інгібіторів тромбіну ефективно активує антикоагуляційні властивості крові.
зв'язування (видалення) іонів Ca2+. За інших рівних умов згортання крові відбувається за активної участі іонів Ca2+. Видалення їх є ефективним механізмом збереження крові у рідкому стані.

Гепарин. Колір кришечки – зелений, світло-зелений

Гепарин – кислий мукополісахарид з молекулярною масою 4000-40000 – є натуральним антикоагулянтом, який є присутнім у будь-якому здоровому організмі. Гепарин активує створення комплексних сполук між антитромбіном III та такими факторами згортання крові, як тромбін, фактори XIIa, XIa, Xa, IXa та VIIa. У такому комплексі фактори згортання інактивуються необоротно.
Для цілей отримання плазми крові в пробірки додають літієву або натрієву сіль гепарину в пропорції до крові, що забирається в пробірку 15-20 МО/1 мл, що служить гарантією повної інактивації згортання крові і не спотворює досліджувані параметри. Еритроцити зберігаються у зразку крові до 8 годин.Не можна використовувати для проведення аналізів зразок крові, що зберігався понад 48 годин навіть за умов холодильника (+4ºС).
Для отримання якісного результату аналізу необхідно:
Негайно після взяття крові обережно перевернути пробірку 5-7 разів для кращого перемішування крові та гепарину,
Плазма відокремлюється після центрифугування. Нормальні швидкості центрифугування – 1000-1500G (2000-3000 об/хв).
У клініці пробірки з гепарином застосовуються, переважно щодо дослідження:
електролітного складу крові,
газового складу крові,
вмісту алкоголю в крові.
Не рекомендується використовувати гепарин для: морфологічних досліджень, оскільки кислотний характер гепарину сприяє знебарвленню мазка крові, надаючи йому голубуватий відтінок, підрахунку лейкоцитів та тромбоцитів, оскільки гепарин стимулює агрегацію цих клітин крові.
досліджень з методики полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР).

Для більш чистого розмежування плазми крові і згустку застосовуються спеціальні пробірки, що містять крім гепарину інертний олефіновий гель. .

Фторид натрію/ЕДТА калію. Колір кришечки – сірий

Додавання фториду натрію та ЕДТА калію в пробірку дозволяє запобігти руйнуванню глюкози крові (процес, званий гліколізом) та зберегти її рівень у взятому зразку крові.
Фторид натрію та оксалат калію виступають як антикоагулянти, зв'язуючи іони Са2+ і, крім того, фторид натрію стабілізує рівень глюкози.
Глюкоза руйнується до пірувату та лактату при послідовному здійсненні різних ензиматичних реакцій. Фторид натрію інгібує деякі ферментативні реакції, включаючи перетворення фосфогліцерату на фосфоенолпіруватацид, і запобігає гліколізу.
Для отримання якісного результату аналізу необхідно:
негайно після взяття крові обережно перевернути пробірку 5-7 разів для кращого перемішування крові та антикоагулянту.
плазма відокремлюється після центрифугування. Нормальні швидкості центрифугування – 1000-1500G (2000-3000 об/хв).
Пробірки з додаванням фториду натрію та оксалату калію використовують для проведення визначення рівня цукру (глюкози) у крові. Співвідношення компонентів 1/1, загальна кількість реагентів, що додаються - 4,5 мг/1 мл крові, що забирається в пробірку.

Зауваження: Фторид блокує активність уреази та деяких інших ферментів. Зразки крові даних пробірок не можна використовувати для прямого визначення ензимів. Фторид натрію та ЕДТА калію пов'язують іон Са2+, замінюючи в крові 1 іон кальцію на 2 іони натрію або калію. Наслідком цього є підвищення напруги іонів у міжклітинній рідині та викачування води з внутрішньоклітинного простору в міжклітинний, зморщування клітин крові з помірним "видавлюванням" з еритроцитів гемоглобіну. Тому видимий гемоліз властивий зразкам крові з цією добавкою.
Глюкоза перетворюється на лактат в результаті комплексу реакцій, що включає різні етапи.Фторид пригнічує один з останніх етапів руйнування глюкози, початкові етапи за участю гексокінази та фосфофруктокінази блокуються менш ефективно, тому можна спостерігати зниження вмісту глюкози у зразку крові на 6-7% від початкового.
Після початкового незначного зниження рівня глюкози її кількість залишається постійною при зберіганні крові в пробірці протягом 8-10 годин при температурі до 25°С та протягом 2-3 днів у холодильнику (+4°С).

ЕДТА-К2. Колір кришечки - бузковий

Етилендіамінтетраацетат (ЕДТА) є кращим антикоагулянтом для гематологічних досліджень. ЕДТА та його лужні солі здатні створювати хелатні сполуки з іонами кальцію з утворенням високостійких розчинних комплексів. Найбільш ефективна концентрація ЕДТА – 1,2 мг/мл крові. У всьому світі використовують три варіанти солей ЕДТА: ЕДТА-К3, ЕДТА-К2 та ЕДТА-Na2. Найбільш кращою та рекомендованою Міжнародною Комісією зі Стандартизації в Гематології є двокалієва сіль ЕДТА:

ЕДТА-К3 показує меншу здатність підтримки крові в рідкому стані, а також ЕДТА-К3 впливає на підрахунок лейкоцитів, занижуючи їх кількість.
відмінності між ЕДТА-К2 та ЕДТА-Na2 у клінічному плані незначні і ними можна знехтувати, але ЕДТА-Na2 гірше розчинний.

Для отримання якісного результату аналізу необхідно:
негайно після взяття крові обережно перевернути пробірку 5-7 разів для кращого перемішування крові та антикоагулянту;
плазма відокремлюється після центрифугування. Нормальні швидкості центрифугування – 1000-1500G (2000-3000 об/хв). При необхідності допускається центрифугування із прискоренням 4000G з кришечкою та до 12000G без кришечки.

Найбільш широко використовуються пробірки, що містять 1,95 мг ЕДТА/1 мл крові. Вони знайшли своє застосування у таких галузях лабораторної практики, як:
гематологічні дослідження - підрахунок клітин крові, визначення ШОЕ та ін.
ПЛР-дослідження (якісні та кількісні методики).

Пробірки із зразками крові можна зберігати до 6-10 годин при 4ºС, зберігання понад 24 години не рекомендується через зниження числа еритроцитів та лейкоцитів.

Цитрат натрію. Колір кришечки - блакитний

Цитрат натрію є антикоагулянтом для збору венозної крові з метою проведення досліджень коагуляційних властивостей крові.

Процес згортання крові є послідовністю складних реакцій, у яких результатом перших реакцій (з участю активних ферментів) є активація наступних, спочатку неактивних ензимів. Останнім активним ферментом у цьому ланцюжку є тромбін, який здійснює перетворення фібриногену на фібрин. Нитки фібрину обплутують клітини крові та остаточно формують кров'яний потік. Дуже важливу роль цьому етапі грають іони Са2+. Антикоагуляційні властивості цитрату виявляються у формуванні комплексу з іонами Са2+ та ефективному видаленні їх із крові.

Загальне дослідження зсідання крові визначається часом, необхідним для послідовної активації ферментів, що беруть участь у коагуляційному процесі. Проводиться визначення часу активації та кількісний вимір різних складових коагуляційного каскаду, для чого створюються так звані "обхідні шляхи" додаванням деяких проміжних продуктів згортання.

Найчастіше використовуються пробірки з 3,8% або 3,2% розчином цитрату натрію (0,129 моль/л), співвідношення цитрату до кількості крові, що забирається 1/9.

Для максимально якісного проведення коагулологічних досліджень рекомендується дотримання певних правил:
не можна використовувати пробірку для взяття крові на коагуляційні тести першої, відразу після венепункції, так як на результати може вплинути тканинний тромбопластин, що виділяється при пункції;
венозний джгут під час взяття крові в пробірку має бути знятий;
негайно після взяття крові пробірку акуратно перевертають 5-6 разів для кращого перемішування крові та антикоагулянту;
відразу після цього треба перевірити кількість взятої крові: її верхня межа має бути на рівні блакитної смужки на етикетці.

Оптимальними умовами зберігання пробірки із зразком крові є температура 20-24ºС та дослідження коагуляційних властивостей та факторів згортання крові має бути проведено протягом 2-х годин з моменту взяття крові